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抗体的纯化硫酸铵沉淀法)1。

基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质，如e68a 84 E8 a2 a 32313333愚人节133332616362。

该方法可以从样品中分离出主要的免疫球，是免疫球蛋白分离的常用方法。

高浓度盐离子可与蛋白质竞争蛋白质溶液中的水分子，从而破坏蛋白质表面的水合膜，降低其溶解度，使其从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质的溶解度不同，因此不同的蛋白质可以被不同浓度的盐溶液沉淀。

这种方法叫做盐析。

盐浓度通常用饱和度来表示。

硫酸铵因其溶解度高、温度系数低、不易使蛋白质变性而被广泛使用。

二。

试剂和仪器。

组织培养上清液、血清样品或腹水等。

2.硫酸铵。

饱和硫酸铵溶液。

蒸馏水5。

PBS(含0.2g /L叠氮化钠)6。

透析袋7号。

超速离心机8。

pH计9。

磁力搅拌器3。

操作步骤以腹水或组织培养上清液为例介绍抗体的硫酸铵沉淀。

不同免疫球蛋白盐析所需的硫酸铵饱和度并不完全相同。

通常用于分离抗体的硫酸铵饱和度为33%-50%。

(1)饱和硫酸铵溶液(SAS) 1的制备。

在搅拌的同时，将767g (NH 4) 2 SO 4缓慢加入1升蒸馏水中。

用氨水或硫酸将硫酸的pH值调节至7.0。

即100%饱和度的硫酸铵溶液(4.1摩尔/升，25C)。

2.不同饱和度的其他铵溶液的制备(2)沉淀。

1.将样品(如腹水)以20000g离心30分钟，以去除细胞碎片；2.保留上清液，测量体积；3.边搅拌边向上清液中缓慢加入等体积的SAS，最终浓度为1: 1。

(4)将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜(4)，使蛋白质充分沉淀。

(三)透析1。

将蛋白质溶液在10000g离心30分钟(4C)。

弃去上清液，保留沉淀物；2.将沉淀物溶解在少量(10-20毫升)PBS-0.2克/升叠氮化钠中。

沉淀后，放入透析袋中用PBS -0.2g /L叠氮化钠透析24-48小时(4)，每3-6小时更换一次透析缓冲液，以彻底去除硫酸铵；3.将透析液离心，并测定上清液中的蛋白质含量。

四。

应用技巧(1)用低浓度硫酸铵预沉淀，去除样品中的外源蛋白。

1.边搅拌边向样品溶液中缓慢加入SAS，使浓度为0.5:1(v/v)；2.将溶液置于磁力搅拌器上，搅拌6小时或过夜(4)；在3.3000g离心30分钟(4C)，保留上清液；然后向上清液中加入SAS至0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。

将沉淀物溶解在PBS中，如前透析，并除去硫酸铵；4.向上清液中加入SAS至0.5:1 (v/v)，再次离心得到沉淀。

将沉淀物溶解在PBS中，如前透析，并除去硫酸铵；5.当杂质蛋白和待纯化蛋白在硫酸铵溶液中的溶解度相差很大时，通过预沉淀去除杂质蛋白是非常有效的。

(2)为避免体积过大，可采用固体硫酸铵盐析(硫酸铵用量见表1)；通过氨沉淀和层析的结合可以获得进一步纯化的抗体。

本文到此结束，希望对大家有所帮助。